Introducción:
La importancia que juega la función mitocondrial alterada en la tumorigénesis, el envejecimiento, las enfermedades neurodegenerativas, metabólicas y cardiovasculares ha estimulado el desarrollo de nuevos enfoques para evaluar la función y el mal funcionamiento mitocondrial. El descubrimiento de mecanismos moleculares relacionados con mitocondrias que subyacen a enfermedades, así como fármacos para prevenir o revertir el desarrollo de estas, aumenta la demanda de ensayos sensibles y con un alto rendimiento. También se reconoce la importancia de las pruebas de detección de fármacos candidatos para la toxicidad mitocondrial. La medición de la tasa de consumo de oxígeno (OCR) de las mitocondrias genera información valiosa, ya que el transporte de electrones y la fosforilación oxidativa consumen oxígeno y reflejan la expresión de los genomas mitocondriales y nucleares de los componentes funcionales de la cadena de transporte de electrones.
Se desarrolló un ensayo de alto rendimiento en el cual la demanda de energía, así como la disponibilidad del sustrato se controlan estrictamente utilizando mitocondrias. Las condiciones optimizadas permiten una medición sensible del OCR y la liberación de protones (acidificación extracelular, ECAR), las mitocondrias aisladas se adhirieron al fondo de una microplaca de cultivo celular (Agilent Seahorse XF). Tras lo cual se realizaron mediciones secuenciales de la respiración basal, estado 3, estado 4 y así como por la respiración estimulada por el desacoplador u otras combinaciones se pueden realizar mediante la adición de reactivos desde los puertos de inyección de fármacos del cartucho de ensayo XF. Esta técnica puede ser útil para estudios de detección de drogas y para permitir la obtención de datos respiratorios en pequeñas muestras de mitocondrias.