Abstracto:
La amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP por sus siglas en ingles) es un método de amplificación de síntesis de ADN con autociclado y desplazamiento de cadena que implica el uso del fragmento grande de Bst ADN polimerasa. Emplea de 4 a 6 primers los cuales reconocen múltiples regiones del ADN diana para la generación de una reacción de amplificación altamente específica. Existen diversos métodos de detección en los que se incluye la fluorescencia y la absorbancia. El método más comúnmente utilizado es un cambio de color por un colorante dependiente del pH, ya que la reacción de polimerización provoca un cambio de pH marcado. Si bien la reacción de LAMP normalmente se realiza a una temperatura uniforme de 65 °C, existen ciertas ventajas con el uso de temperaturas más altas cuando se ejecuta esta tecnología de ensayo.
Los datos obtenidos en esta nota de aplicación mostraron que el uso de temperaturas superiores a 65 °C puede mejorar el rendimiento de los ensayos LAMP. Las temperaturas elevadas aumentan la rigurosidad de recocido de la reacción, reduciendo así la probabilidad de que se produzcan reacciones inespecíficas falsas.
Esta nota de aplicación describe el uso del lector multimodal Agilent BioTek Synergy H1 con una temperatura de reacción de 69 °C para reducir el tiempo necesario para obtener reacciones positivas en el ensayo LAMP.